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  • 如何做好抗体监测

    发布时间:2014-6-27 8:09:03

    规模化养殖在提高养殖效率的同时,也面临着高密度饲养带来的传染性疾病威胁,而现阶段对猪群重大传染性疾病监测最简单有效的方法就是抗体监测,因此做好猪群的抗体监测是评估猪群健康状况的重要措施。抗体监测主要包括三个内容:样品采集、实验室检测和抗体水平评估。其中样品采集是基础,不恰当的采集方式只会片面反映猪场的健康状况,干扰后续免疫计划的制订;实验室检测提供结果,不精确的结果会误导分析人员对抗体水平的评估;抗体水平评估则是反映猪场健康状况、规避疾病风险的直接依据。

    一、 样品采集

    如果检测样品本身存在问题,即使实验室检测和抗体评估正常,得到的结果也会不准确,从而不能正确反映猪群的健康情况。因此做好抗体监测的基本要求就是保证科学、正确地采样,主要包括:

    1、样本本身质量:当血样由于采集和保存不当时容易出现溶血现象,影响抗体检测的准确性,特别是对于伪狂犬gE抗体鉴别检测,溶血会导致假阳性率明显升高,因此在样品采集过程中要减少对血样容器的晃动,避免红细胞破裂溶血;其次是样品采集后要在室温放置半小时,待血清自然析出后再次分离标记,冷藏短期保存或冷冻长期保持,自然析出时切勿放在37℃中;最后是运输途中保持低温环境,尽快送达,以免血清腐败和抗体降解。

    2、样本采集分布:在猪场内多个阶段猪群并存,不同阶段猪群的免疫背景不同,因此在样本采集时要注意样本分布来源:首先采样要包含各个不同的生长阶段,且要达到一定的数量,常规抗体监测时每个阶段群体样本数量在5%-10%之间,最低不能少于5头,样本量过低则不能反映整体的情况,样本量过高则成本高企而置信度提高细微。其次是在对某一阶段猪群采样时,要考虑到这一阶段猪只的栏舍分布,力求样本能覆盖更多的猪栏,且采集样本要均匀分散。只有样本比例足够,覆盖面大,分散均匀时才能准确反映整体情况。

    3、连续采样计划:抗体本质是机体产生的球蛋白,其存在时间受机体免疫功能、营养水平、环境因素等多个方面的影响,短期的高抗体水平对猪群的健康指示意义并不大,对猪群特别是种猪群必须定期进行抗体监测,在一个较长的时间跨度上掌握抗体水平的动态变化,以期随时做出调整,理想的抗体检测频率为每年3-4次。

    二、实验室检测

    当前主流的抗体检测方法是ELISA法,该方法由于包被的抗原蛋白纯化程度高,结构稳定,具有特异性强,敏感性高的特点;又因为操作较为简单,可以同时检测大批样品,所以这种方法在现阶段最为普遍。但是看似简单的ELISA实验中影响因素也是众多,若要保证检测结果的准确性,试剂盒选择、实验技能、人员素质三方面均要综合考虑。

    1、试剂盒选择:抗体检测中试剂盒的选择是非常重要的,即使是国家批准的商品化试剂盒,对同一样品的检测结果也可能有较大差异的,因此在试剂盒的选择中要多方比较,选择稳定、特异性强、口碑好的试剂盒,才能得到准确的结果。

    2、实验技能:在抗体检测中,按说明书进行实验操作是最基本的技能,经过培训后实验员一般都能较为熟练掌握。但是影响检测结果的细节因素很多,如反应板的湿化、酶标的污染、底物的氧化等都是容易忽略而又会影响实验结果,因此熟练操作实验只是最基本的要求,此外还要对各种外在因素的影响了然在心,提前预防才能为抗体分析提供最精准的基础资料。

    3、人员素质:由于抗体检测样本量大,长时间加样极易引起检测人员的视觉疲劳、反应迟钝和失神,容易出现加偏、漏加、误加等现象,得出错误结果。因此抗体检测除了要求实验人员有良好操作水平,还要有较强的耐心和高度集中的注意力。

    三、抗体水平评估

    在样本采集代表性强、实验室检测准确性高的前提下,抗体水平的评估分析才具有临床意义。在没有进行免疫的情况下,抗体检测用于评估野毒感染的程度和比例;在已经免疫的情况下,抗体检测用于评估疫苗效果和猪群的健康状反映指抗体的整体效价,阳性率反映整体的抗体合格率,离散度用来评估抗体水平的整齐度,即个体值与平均值的差异程度。

    1、平均值:平均值用来衡量猪群某一阶段的整体水平,体现了猪群的整体抵抗力。但是不同生长阶段的猪群同一种疾病的抗体水平标准也是不一样的,在进行抗体评估的时候不能一概而论。以猪瘟抗体为例:用常用的IDEXX试剂盒检测,种猪的抗体阻断率平均值必须达到80%以上视为合格,而育肥猪的抗体阻断率平均值达到60%即视为合格。这是因为种猪群是长期存栏,要有较高的抗体水平来保持种猪群的稳定及为哺乳仔猪提供母源抗体保护,但是育肥猪存栏时间只有3个月左右,只需要保护自身到出栏即可,所以二者的标准是不一样的,因此在抗体评估中区别猪群背景是很重要的,否则会造成错位评估。其次是要结合免疫时间来评估,抗体水平是随着时间消长变化的,即使免疫后不同时间检测的抗体水平相同,但它反映的猪群情况是不一样的。因此抗体评估人员除了了解不同生长阶段猪群的各种疾病抗体平均值合格标准外,还要密切注意、区分群体的免疫背景和生长背景。

    2、阳性率:阳性率是体现整体免疫效果的指标,野毒抗体鉴别是阳性率越低越好,但是常规免疫的抗体评估则是抗体水平阳性率越高越好,以伪狂犬病抗体阳性率为例:当猪群伪狂犬病抗体阳性率越高时,则群体对野毒的抵抗力越强,则阴性猪群被野毒感染的几率也会变小;而猪群伪狂犬病阳性率降低时,则意味着群体对野毒的抵抗力降低,群体被感染的风险增大。 抗体阳性水平细分时可分为临界值、弱阳性、强阳性等,但是在统计阳性率的时候这些阳性值均被计入,就会造成阳性率含“水分”的情况,如猪瘟抗体:两个相同种群的阳性率均为100%,但其中一个群体阻断率平均值为80%,为强阳性;另外一个群体阻断率平均值为45%,接近转阴临界值,这两个阳性率相同的群体其抗体水平和健康状况却是相差甚远的,因此不要孤立地来使用阳性率这一指标,要结合其他指标一起综合评价。

    3、 离散度:离散度是抗体评估中一个很重要的指标,它是对平均值和阳性率两个指标的补充,只通过平均值和阳性率来评估猪群的抗体水平也是片面性的,必须以离散度作为限制指标才能综合评价。不同疾病抗体的离散度抗体标准也是不一样的,这与抗原的作用机理和疫苗成熟度是相关的,如猪瘟、伪狂犬病、口蹄疫等疾病在我国已经有成熟的疫苗,临床使用效果理想,正确使用会产生整齐而高水平的抗体,抗体离散度小于0.25视为合格。但是蓝耳病和圆环病毒病由于在国内是普遍感染流行,且是免疫抑制性疾病,疫苗免疫产生的抗体也会受到干扰呈现一定程度的参差不齐,因此蓝耳病和圆环病毒病的抗体离散度小于0.4即为合格。离散度越大,表明猪群个体的健康状况差异大,特别是极大值和极小值同存时,野毒感染的几率是比较大的,因为野毒可以同时引起免疫抑制和异常偏高的抗体值。

    四、小结

    综上所述,要科学、正确做好抗体监测首先要求养殖场采样人员科学、正确采样;其次是选择有资质的、严谨的检测机构进行检测;最后要求评估人员具有丰富的临床经验,熟悉猪场生产的各个环节,了解猪群不同生长阶段的应有的正常抗体水平、随着日龄变化抗体水平的消长情况,并能全盘考虑疾病之间相互作用对抗体的影响,才能作出科学评估,指导猪场制订下阶段免疫计划。这个过程中,养殖场、检测机构、分析人员三方是紧密合作,不能有任何疏忽,疏忽者终将被市场淘汰。

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